貨源介紹
質(zhì)粒載體網(wǎng)是質(zhì)粒構(gòu)建及應(yīng)用研究的專業(yè)平臺,提供質(zhì)粒構(gòu)建和應(yīng)用技術(shù)的最新進展和實用方法,為科研人員提供質(zhì)粒相關(guān)研究的最新動態(tài)和資源支持。
一、CA46細胞源于Burkitt's淋巴瘤病人的腹水液，是Magrath建立的系列淋巴瘤細胞系之一。CA46細胞EBV核抗原(EBNA)陰性，表達表面IgM和分泌不能與A蛋白結(jié)合的IgM，12％的群體細胞表達補體受體，但不表達Fc受體。CA46細胞生長的群體倍增時間是16小時，具較快的生長速度。
種屬:人
組織來源:腹水液
生長特性:懸浮
細胞形態(tài):淋巴母細胞樣
生長培養(yǎng)基:RPMI-1640＋20%FBS＋1%P/S
培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃
二、Raji(人Burkitt's淋巴瘤細胞)的功能
（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。
（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應(yīng)。
（3）與血管疾病的進展和穩(wěn)定有關(guān)。
生理變化：
（1）主動脈硬化。
（2）主動脈瘤
（3）主動脈鈣化。
基本特性：
（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。
（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（4）每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。
（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗證。
（6）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
三、Raji(人Burkitt's淋巴瘤細胞)的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1細胞的復(fù)蘇培養(yǎng)從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液,以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2細胞傳代原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3細胞形態(tài)的觀察在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4細胞的計數(shù)常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4)×104。
1.5細胞的貼壁率指數(shù)生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù))×100％，計算貼壁率。
1.6生長曲線取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線。
四、注意事項
(1)嚴格無菌操作；
(2)本產(chǎn)品只供科研使用，不可應(yīng)用于臨床。
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